ELISA（酶联免疫吸附试验）试剂盒的工作原理是基于抗原与抗体的特异性结合反应，通过酶标记的信号放大系统来检测目标分子（如蛋白质、抗体、激素等）。以下是其工作原理的详细步骤：

1、‌包被（Coating）‌：

将已知的抗原或抗体固定在微孔板的孔壁上，形成固相支持物。

2、‌封闭（Blocking）‌：

加入封闭剂（如BSA或脱脂奶粉）封闭未被占据的位点，减少非特异性结合。

3、加样（Sample Addition）‌：

加入待测样本（如血清、细胞培养上清等），样本中的目标分子会与固相上的抗体或抗原特异性结合。

4、‌洗涤（Washing）‌：

洗去未结合的物质，避免干扰后续步骤。

5、加入酶标记抗体（Detection Antibody）‌：

加入与目标分子结合的酶标记抗体（如辣根过氧化物酶HRP或碱性磷酸酶AP），形成“固相抗体-目标分子-酶标抗体”复合物。

6、再次洗涤（Washing）‌：

洗去未结合的酶标抗体。

7、显色（Substrate Addition）‌：

加入酶的底物（如TMB或OPD），酶催化底物反应生成有色产物。

8、‌终止反应（Stop Solution）‌：

加入终止液（如硫酸）终止反应，颜色深浅与目标分子浓度成正比。

9、检测（Measurement）‌：

使用酶标仪测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算目标分子的浓度。

特点：

‌高特异性‌：基于抗原-抗体的特异性结合。

‌高灵敏度‌：酶标记信号放大，可检测极低浓度的目标分子。

‌高通量‌：适合大规模样本检测。

以上就是小编给大家介绍的正确操作ELISA试剂盒相关知识哦，武汉基因美生物专注于ELISA试剂盒、抗体生产厂家，主营人、大鼠、小鼠、猪、牛、羊、植物等ELISA试剂盒，单克隆抗体、多克隆抗体及标记抗体，种属齐全，高灵敏、高特异性，支持定制与免费代测，产品品质一流，欢迎大家前来咨询。