【技术视频】细胞复苏与冻存

细胞冻存和复苏技术是细胞培养过程中较为基础的实验操作，此举对于细胞的保种以及细胞活力的维持有着重要意义。

关于此实验也可以参考以下技术文章：http://www.daucell.cn/tech_support/shownews.php?id=40

细胞复苏与冻存操作步骤：

1.将冻存的细胞从液氮罐中取出

2.移至37℃水浴中，使细胞迅速融化

3.用酒精给手消毒

4.将所需培养基，要复苏的细胞用酒精消毒后，拿入工作台并放置酒精灯附近

5.离心管上写好细胞名称

6.用镊子小心撕掉封口膜

7.打开培养基及离心管盖子

8.用移液枪吸取2ml培养基至离心管中，盖子过火后立马盖上

9.用镊子拧开冻存管盖子

10.1ml移液枪吹打冻存液后转移至离心管

11.吹打几下，混匀培养基和冻存液管

12.离心机1500r，3min离心存液管

13.点燃酒精灯

14.从离心机里取出细胞

15.配平离心管按顺序放好

16.离心管底部为细胞沉淀，酒精消毒放入工作台

17.拿出培养瓶，写好细胞名称、日期、培养基等基本信息

18.用移液枪移取5ml培养基于培养瓶中

19.弃去上清，用移液枪吸掉剩余废液

20.1ml培养基重悬细胞并转移至培养瓶中

21.盖上盖子，放入培养箱

22.将培养瓶按照十字晃动，让细胞均匀分散

23.动作缓慢的放入培养箱

24.将血清和DMSO酒精消毒后放入操作台

25.小心去除封口膜

26.准备一管9mL的血清

27.吸取1mLDMSO缓慢加入血清中混匀

28.冻存液做好标记

29.将离心后的细胞和冻存管酒精消毒后放入操作台

30.在冻存管上详细标注细胞名称，冻存时间，操作人员等信息

31.去除上清，用移液枪吸掉剩余废液

32.加入1mL配制好的冻存液重悬细胞

33.将细胞转移至冻存管

34.将冻存管用封口膜封口后转移至梯度降温盒中

35.将梯度降温盒转移至-80℃冰箱放置过夜

36.小心取出液氮罐冻存架

37.取出将要放置的冻存盒

38.将梯度降温盒中的细胞放入冻存盒

39.放回冻存盒

40.放回冻存架

细胞复苏与冻存1

细胞复苏与冻存2

细胞复苏与冻存3

细胞复苏与冻存4