细胞培养基础篇-复苏

细胞培养看似简单，但实则有很多细节需要注意，今天就从最基础的细胞复苏说起，当然内容主要还是针对新入门的“学徒”，如有不足之处，也请广大站友不吝赐教。


操作步骤：

1.从液氮罐中取出冻存管，放入37度水浴锅中融化，800-1000rpm离心3-5min；

2.慢慢吸去上清，加入适量完全培养基重悬细胞团，转移至培养皿或细胞瓶；

3.补足完全培养基，放37度培养箱中培养。

注意细节：

1.从液氮罐中拿出冻存管时要做好防护工作，特别是避免液氮溅到眼睛里，有条件的实验室可以配备防冻手套和护目镜；

2.取出的冻存管要先确认管内没有液氮，再放入37度水浴锅，有液氮的情况下很容易因为管内压强突然增大而导致冻存管炸裂，轻则细胞无法使用，重则伤及实验人员；

3.融化过程中要不断轻轻摇晃冻存管，使其尽快融化，但摇晃程度要把握得当，不能让水浴锅中的水渗进冻存管中；

4.离心的具体转速和时间视细胞而定，通常难养的细胞需要降低转速，缩短时间，以减少离心对细胞的伤害；

5.部分对离心敏感的细胞（主要是原代细胞）可以采用融化后不离心，直接重悬后补足培养基培养，待其贴壁后再换液去掉冻存液中DMSO的方式处理；

6.如果冻存细胞量不多，可以在冻存管盖上标注离心方向，以便确定离心后细胞团位置，吸去上清时调整冻存管角度，使细胞团位于最下方，可以尽量减少细胞损失。