细胞培养基础篇-传代

传代是贴壁细胞培养过程中不可或缺的一步，也是最容易出问题的一步，今天就来说下细胞传代的操作步骤和注意细节。

操作步骤：

1.用移液器吸走原培养基，加入适量PBS洗1-2遍；

2.加入适量胰酶，置于培养箱中消化；

3.待消化到位后加入适量血清或完全培养基终止消化，800-1000rpm离心3-5min；

4.去上清，加入适量完全培养基重悬后转移到培养皿，放37度培养箱。

注意细节：

1.吸走原培养基时尽量吸尽，用PBS漂洗时也是，此步骤的目的是尽量减少培养基中血清对胰酶消化时的影响；

2.加入胰酶量要根据培养皿规格和细胞量决定，通常以刚没过细胞为宜；

3.消化时间需要同时考虑到细胞本身特性，细胞密度，胰酶浓度等多方面因素，灵活调整，切忌生搬硬套；

4.通常细胞消化到其刚好不贴壁时终止最好，如果消化不到位，靠外力强行吹下来，则细胞膜很容易被撕裂，导致传代后出现细胞碎片和死细胞；如果消化过度，则细胞膜通透性会发生改变，导致传代后出现凋亡细胞。

5.部分对离心敏感的细胞（主要是原代细胞），可以加入胰酶后室温放置30s左右，然后吸去大部分胰酶，再放培养箱消化，消化到位后直接加入足量完全培养基终止消化，待其贴壁后再换液去掉残余胰酶。

6.传代过程中加入任何试剂都应该轻柔缓慢的加到皿壁，切忌直接加到细胞面上，如果细胞本身贴壁能力较差，可能导致细胞凋亡。